Τόμος 16 (1998) – Τεύχος 2+2Σ – Άρθρο 3 – Επιθεώρηση Κλινικής Φαρμακολογίας και Φαρμακοκινητικής-Ελληνική Έκδοση – Volume 16 (1998) – Issue 2+2Σ – Article 3 – Epitheorese Klinikes Farmakologias και Farmakokinetikes-Greek Edition

Η Συμ­βο­λή της Χρω­μα­το­γρα­φί­ας Λε­πτής Στι­βά­δας στη Με­λέ­τη του Μη­χα­νι­σμού Α­νά­πτυ­ξης Α­ντί­στα­σης στα Αμινογλυκοσιδικά Α­ντι­βιο­τι­κά με την Πα­ρα­γω­γή Α­δρα­νο­ποι­η­τι­κών Εν­ζύ­μων

Α TLC Method for the Study of Microbial Resistance to Aminoglycoside Antibiotics by Inactivating Enzymes

Σκεπαστιανός,Π.,Παπαϊωαννίδου,Π., Χατζητόλιος,Α., Μήρτσου-Φιδάνη,Β.  : Η Συμ­βο­λή της Χρω­μα­το­γρα­φί­ας Λε­πτής Στι­βά­δας στη Με­λέ­τη του Μη­χα­νι­σμού Α­νά­πτυ­ξης Α­ντί­στα­σης στα Αμινογλυκοσιδικά Α­ντι­βιο­τι­κά με την Πα­ρα­γω­γή Α­δρα­νο­ποι­η­τι­κών Εν­ζύ­μων , Επιθεώρηση Κλιν. Φαρμακολ. Φαρμακοκινητ. 16 :  (1998)

Skepastianos,P., Papaioannidou,P., Hatzitolios,A., Mirtsou-Fidani,V. : Α TLC Method for the Study of Microbial Resistance to Aminoglycoside Antibiotics by Inactivating Enzymes, Epitheorese Klin. Farmakol. Farmakokinet. 16:  (1998)

Ελληνικά – Greek

Αμινογλυκοσιδικά αντιβιοτικά, μικροβιακή αντίσταση, αδρανοποιητικά ένζυμα, χρωματογραφία λεπτής στιβάδας

Άρθρο

Article

Ο σπου­δαι­ό­τε­ρος μη­χα­νι­σμός με τον ο­ποί­ο α­να­πτύσ­σε­ται α­ντί­στα­ση των μι­κρο­ορ­γα­νι­σμών στα α­μι­νο­γλυ­κο­σι­δι­κά α­ντι­βιο­τι­κά συ­νί­στα­ται στην πα­ρα­γω­γή εν­ζύ­μων τα ο­ποί­α τρο­πο­ποι­ο­ύν τη χη­μι­κή δο­μή των α­ντι­βιοτι­κών με­τα­φέ­ρο­ντας στο μό­ριό τους α­κε­τυ­λο-, α­δε­νυ­λο- και φω­σφο­ρυ­λο-ο­μά­δες. Στην ερ­γα­σί­α αυ­τή α­να­πτύσ­σε­ται μέ­θο­δος χρω­μα­το­γρα­φί­ας λε­πτής στι­βά­δας (TLC) για την α­νί­χνευ­ση των εν­ζύ­μων α­δρα­νο­ποί­η­σης των α­μι­νο­γλυ­κο­σι­δι­κών α­ντι­βιο­τι­κών, με την ο­ποί­α ε­ντο­πί­ζε­ται και η α­κρι­βής θέ­ση υ­πο­κα­τά­στα­σης. Τα α­ντι­βιο­τικά που ε­με­λε­τή­θη­σαν εί­ναι η το­μπρα­μυ­κί­νη, η νε­τιλ­μι­κί­νη, η κα­να­μυ­κί­νη και η α­μι­κα­κί­νη. Η α­νί­χνευ­ση των εν­ζύ­μων α­δρα­νο­ποί­η­σης έ­γι­νε σε εκ­χύ­λι­σμα που ε­λή­φθη α­πό μι­κρο­ορ­γα­νι­σμούς αν­θε­κτι­κούς σε αυ­τά, με τη μέ­θο­δο σύν­δε­σης σε χαρ­τί φω­σφο­κυτ­τα­ρί­νης. Το ε­λεύ­θε­ρο κυτ­τά­ρων εκ­χύ­λι­σμα και το α­μι­νο­γλυ­κο­σι­δι­κό α­ντι­βιο­τι­κό ε­πω­ά­σθη με α­κε­τυ­λο-συ­νέν­ζυ­μο Α ή α­δε­νυ­λο­συ­νέν­ζυ­μο Α ή φω­σφο­ρυ­λο­συ­νέν­ζυ­μο Α στους 37 οC ε­πί δυο ώ­ρες και ε­το­πο­θε­τή­θη σε πλά­κα χρω­μα­το­γρα­φί­ας λε­πτής στι­βά­δας με ε­πί­στρω­ση πη­κτής διο­ξει­δί­ου του πυ­ρι­τί­ου. Η υ­γρή φά­ση ή­το μίγ­μα χλω­ρο­φορ­μί­ου-με­θα­νό­λης-αμ­μω­νί­ας και η εμ­φά­νι­ση έ­γι­νε με ψε­κα­σμό δια­λύ­μα­τος νι­νυ­δρί­νης σε βου­τα­νό­λη 1% w/v. Για κά­θε ε­ξέ­τα­ση ε­χρη­σι­μο­ποι­ή­θη­σαν οι κα­τάλ­λη­λες ου­σί­ες α­να­φο­ράς. Τα υ­πο­κα­τε­στη­μέ­να (α­κε­τυ­λιω­μέ­να, α­δε­νυ­λιω­μέ­να ή φω­σφο­ρυ­λιω­μέ­να) πα­ρά­γω­γα των α­ντι­βιο­τι­κών ε­λή­φθη­σαν σε δια­φο­ρε­τι­κές θέ­σεις (δια­φο­ρε­τι­κά Rf) α­νά­λο­γα με τη θέ­ση υ­πο­κα­τά­στα­σης. Η χρω­μα­το­γρα­φί­α λε­πτής στι­βάδας α­πο­τε­λεί α­πλή, τα­χεί­α και οι­κο­νο­μι­κή μέ­θο­δο για τη με­λέ­τη της α­δρα­νοποί­η­σης των α­μι­νο­γλυ­κο­σι­δι­κών α­ντι­βιο­τι­κών με την πα­ρα­γω­γή εν­ζύ­μων τα ο­ποί­α τρο­πο­ποι­ο­ύν τη δο­μή των α­ντι­βιο­τι­κών και ο­δη­γούν στην α­νά­πτυ­ξη αντί­στα­σης.

A thin layer chromatographic method (TLC) has been developed for the detection of inactivated aminoglycoside antibiotics by microbial enzymes which acetylate, adenylate or phosphorylate the drugs. The following aminoglycoside antibiotics were studies: tobramycin, netilmicin, kanamycin and amicacin. The inactivating enzymes were detected by phosphocellulose paper binding assay in a cell free extract of microorganisms resistant to the drugs. The cell free extract and the aminoglycoside antibiotic were incubated with acetyl-coenzyme A, adenyl-coenzyme A or phosphoryl-coenzyme A in 37 oC for 2 hours. The product of the incubation was placed on a silica gel thin layer chromatography plate. The liquid phase was a chloroform-methanol-ammonia mixture and the chromatogram was developed by spraying a mixture of ninhydrin in butanol 1% w/v. The acetylated, adelylated or phosphorylated antibiotics were recorded in different positions (showing different Rf values) according to the type and the position of substitution. This TLC method provides a simple, rapid and inexpensive way of studying inactivation of aminoglycoside antibiotics by microbial enzymes and development of resistance.